?諾賽基因可以提供專業,個性化定制的基因組服務,我們擁有先進的儀器設備以及一系列專業的基因組解決方案,可以確保您得到快速準確的服務以及專業全面的檢測報告。?

技術服務

一、TA克隆?????????

項目介紹

TA克隆技術(TA cloning)利用Taq聚合酶具有末端轉移酶活性,可在PCR產物的3'端加上一個非模板依賴堿基“A”。T載體是一種高效克隆PCR產物的專用開環載體。因其3'端帶有一個突出的“T”尾,能高效地與帶“A”尾的PCR產物連接,極大地提高了克隆的效率。TA克隆是目前克隆PCR產物最簡便、快捷的方法。

實驗流程

送樣要求

(1)TA克隆項目的樣本類型一般是以PCR產物居多,或是特異性酶切產物片段用于做TA克隆的樣本建議長度3K。

(2)需要提供克隆片段的相關信息,包括名稱、大小、樣品是否帶有“A”尾以及PCR產物是否已純化。已純化的PCR產物請確保使用的溶劑為滅菌的雙蒸水。

(3)PCR已純化樣品,要求濃度≥20ng/μl,體積≥20μl;PCR未純化樣品要求濃度≥50ng/μl,體積≥25μl。所需DNA的總量會隨片段大小的不同而有所變化。樣品定量檢測結果以實際為準。

4)請務必在訂單上注明 PCR所用引物序列,便于克隆結果的核對分析。

提供的結果

(1)測序原始圖譜和序列。

(2)要求測通的樣品可以提供拼接序列。

備注:

(1)鑒定結果以測序序列(或拼接序列)、質粒返樣形式呈現。

(2)當克隆結果中包含客戶提供的單向部分引物序列,即視實驗成功。

(3)若序列中包含高GC、Poly等特殊或復雜結構導致測序中斷,屬于非實驗因素,實驗也屬于成功檢測。

(4)項目完成客戶若無要求返還菌液或質粒等,則默認保存一個月后由我司滅菌消毀

訂購信息

(1)E-mail:測序部dnaseq@vip.163.com。

(2)電話訂購:010-67873039/4478,010-67868644;萬經理:13810506625;李經理:13522520637。

(3)QQ咨詢:——————。

(4)相關資料:TA克隆測序訂購表。

二、菌種鑒定?????????

項目介紹

菌種鑒定一般是指提取樣品基因組DNA,然后PCR擴增相對應的片段,經上機測序之后,在數據庫GeneBank比對序列即可。菌種鑒定項目一般采用核酸序列分析法分析細菌16S rDNA/16S-23S rDNA區間序列、酵母18S rDNA/26S rDNA(D1/D2)序列及絲狀真菌的18S rDNA/ ITS1-5.8S-ITS2序列,提供科學的鑒定結果。一般序列相似度在98%以上,可以認為是同一個種細菌(DNA序列僅作為一個參考指標)。?

實驗流程

送樣要求

菌種鑒定項目的樣本類型一般是沉菌/單菌落菌液/平板(以單菌落/平板為宜)。

送樣要求:

1)建議務必仔細閱讀、填寫和提交《微生物菌種鑒定評價協議書》,未填寫協議書的樣品不予受理。(此項可以參考CICC菌種鑒定與評價服務項目)。

2)委托鑒定菌株應為非致病菌,且來源明確;若屬于中華人民共和國衛生部制定的《人間傳染的病原微生物名錄》之內菌株,將停止鑒定實驗。

3)需要提供送檢樣本的相關信息,包括名稱、培養基相關信息、菌落平板生長時間。且平板樣本需要出現單菌落,建議使用分區劃線法,避免平板上菌落過于密集生長。

4)請務必在訂單上注明菌種鑒定詳細需求,一般默認是鑒定到

5)項目完成兩周后,若客戶無要求返還平板樣品等,則默認滅菌處理。

提供的結果

鑒定結果一般是以測序序列(或拼接序列)、菌種鑒定報告形式呈現,包括

(1)菌種鑒定報告(文檔)

(2)測序原始圖譜和序列

3)樣品拼接序列

諾賽基因DNA測序登記單

諾賽基因96DNA測序登記單

?諾賽基因通用引物表

QQ咨詢:——————

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(4)相關資料:菌種鑒定訂購單。

三、SNP位點(單核苷酸多態性分析)檢測?????

項目介紹

SNP(single nucleotide polymorphism),即單核苷酸多態性或單堿基多型性,主要是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態性,是一種較為常見的人類可遺傳的變異。SNP以單個堿基的顛倒、轉換、插入和缺失等形式存在。SNP檢測服務是檢測染色體基因組中單個核苷酸的突變而引起的DNA序列的多態性的技術服務。作為第三代分子遺傳標記,與其分子標記相比,SNP分辨率最高也最為豐富,覆蓋基因組范圍大,遺傳上比較穩定。

實驗流程

根據實驗目的和通量不同,有幾種方式進行SNP檢測。


方法

儀器平臺

單個反應點數

應用領域

TaqMan探針法

熒光定量PCR

1-2

大量樣本且檢測位點少

擴增測序方法

ABI測序儀

1-5

樣本最少且位點數少、位點驗證發現特定區域內的SNP

SNaPshot法

ABI測序儀

1-15

中等樣本數且檢測位點數中等通量

ARMS-PCR 法

ABI測序儀

1-20

有長期常規需求或特大量樣本.如臨床需求、大田作物檢測等。

KASP方法

7900PCR儀

數個至數十

技術成熟,通量越高優勢越明顯

MassARRAY 法

Sequenom質譜儀

1-30

大量樣本且中等通量檢測、不涉及熒光標記的檢測

芯片法

SNP芯片

數十萬

人源樣本高通量位點檢測

目標區域測序/ 重測序

高通量測序平臺

數萬至數百萬

全基因組檢測、特定或復雜需求發現新的SNP

高通量擴增子測序

高通量測序平臺

數十至數萬

個性化定制中高通量panel

送樣要求

SNP位點檢測項目的樣本類型一般是核酸DNA。

1)需要提供樣本的相關信息,包括樣本名稱及數量、核酸類型、檢測位點數量等。

2)在訂單上注明樣本的檢測需求,根據不同的方法進行實驗設計。

3)組織樣品送的核酸樣本300mg;血液樣本1ml;游離DNA1ng;基因組類樣品要求濃度50ng/μl,體積≥20μl。

4)項目完成兩周后,若客戶無要求返還樣品等,則默認為樣品將被處理。

提供的結果

檢測結果一般是以測序序列(或拼接序列)和文字表格形式呈現。

可以提供的結果如下:

(1)設計、合成的SNP位點引物。

(2)測序原始圖譜和序列。

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四、實時熒光定量PCR

項目介紹

實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)是通過對PCR擴增反應中每一個循環產物熒光信號的實時監測從而實現對起始模板定量及定性的分析。主要分為熒光染料法(SYBR Green I)和熒光探針法(Taqman 技術)。

實驗流程

SYBR GreenI是熒光定量PCR常用的DNA結合染料之一,可以與雙鏈DNA非特異性結合。SYBR Green I在游離狀態下會發出微弱的熒光,一旦與雙鏈DNA結合,其熒光值會指數級增加。所以,一個PCR循環反應發出的全部熒光信號與雙鏈DNA量呈比例,隨著PCR擴增產物的增加而增加,其熒光信號強度與PCR產物的數量呈正相關。

熒光探針法(Taqman 技術)是指PCR擴增時,加入一對引物的同時再加入一個特異性的熒光探針。該探針為一條寡核苷酸,兩端分別標記一個熒光報告基團和一個熒光淬滅基團。探針完整時,報告基團發出的熒光信號被淬滅基團吸收,PCR 儀檢測不到熒光信號PCR擴增時(延伸階段),Taq 酶的5'-3'切酶活性將探針酶切,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統接收到熒光信號。即每擴增一條DNA鏈,即形成一個熒光分子,實現了熒光信號的累積與 PCR 產物形成同步。

送樣要求

實時熒光定量PCR檢測項目的樣本類型一般是核酸。

1)提供樣本、RS號或NCBI可查詢目的基因的序列號。

2)提供核酸樣本要求:RNA要求濃度≥20ng/μl,體積≥15μl,OD值接近2.0左右,電泳18s、28s條帶清晰;DNA濃度≥20ng/μl,體積≥25μl,A260/280比值在1.8-2.0。

3)提供的樣本需要標記詳細的編號、名稱、檢測位點名稱及數量等。

提供的結果

檢測結果一般是以EXCEL原始擴增數據和實驗結果報告形式呈現。

內容包括:

(1)設計、合成的檢測位點引物;

(2)原始擴增數據EXCEL或曲線圖;

(3)數據分析結果;

4)檢測報告。

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